I. 細胞培養フラスコとは?
細胞培養フラスコは、細胞培養に用いられる一般的な実験器具です。高品質のポリスチレン(PS)素材で作られ、超精密金型と完全自動化された製造工程を用いて製造されています。この製品は実験室での細胞培養に使用され、優れた光学特性により顕微鏡観察が容易で、表面は細胞接着性を高めるためにTC処理されています。
II. 細胞懸濁液の培養フラスコへの接種
1. 細胞懸濁液の混合:必要な実験濃度に従って細胞懸濁液を調製し、培養フラスコ、培養容器、またはその他の容器内で十分に混合します。
2. ピペットまたはパスツールピペットを用いて、細胞懸濁液を細胞培養フラスコにゆっくりと一定の速度で注入します。液が飛び散ったり泡立ったりしないように注意してください。(多層細胞培養フラスコの場合は、液が均一に分配されるように特に注意が必要です。フラスコを傾けたり回転させたりすることで、各層への液の均一な流れを確保できます。)
3. 培養フラスコを安定した作業台に静かに置きます。滑らかで平らな面が上向き、勾配のある面が下向きになるようにしてください(積み重ね可能な設計で取り扱いが容易です)。
4. 細胞培養フラスコを適切なインキュベーターに入れ、適切な温度(例:37℃)、湿度、ガス濃度(例:5% CO₂)を設定します。
5. 細胞を培養フラスコ内で一定期間培養します。
III.培養培地の交換
1. 古い培養培地の除去:培養培地を吸引する際は、フラスコを滑らかな面を手前にして45度の角度に傾けます。パスツールピペットまたはピペットを用いて、付着細胞を剥がさないように注意しながら、古い培養培地を優しく吸引します。培養培地中に浮遊細胞や不純物が多く含まれている場合は、PBS緩衝液で1~2回洗浄して不純物を取り除きます。
2. 新しい培養培地の添加:古い培養培地を除去した後、適切な量の培養培地を培養フラスコに加えます。付着細胞に直接触れないように、培養フラスコの側壁から培地を加えます。同時に、細胞密度と増殖速度に基づいて、正常な細胞増殖を確保するために、添加する新しい培養培地の量を決定します。
IV.細胞回収
1. 古い培養液の除去:細胞培養フラスコから古い培養液を静かに吸引除去し、適量のPBS緩衝液を加えて軽く振とうし、残存培養液を洗い流して細胞表面を清潔にします。
2. 細胞の消化と停止:適量のトリプシン(3ml以上)を加えて2~3分間消化し、その後、血清含有培養液を加えて消化を停止します。
3. 細胞の回収:ピペットを用いて細胞懸濁液を遠心分離管に移し(泡立ちに注意)、適切な速度(例:800rpm)で5分間遠心分離して細胞を遠心分離管の底に沈殿させます。
4. 細胞沈殿物の回収:遠心分離後、遠心分離管の上清を静かに捨てます(細胞沈殿物は捨てないでください)。遠心分離管から細胞沈殿物を回収し、実験に必要なさらなる処理を進める。