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4つの一般的なPCR機器の違いと応用

2021-08-17 11:09:39
PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)は、分子生物学の研究において非常に重要なツールです。 これは、分子クローニング、遺伝子発現分析、遺伝子型決定、配列決定、突然変異など、さまざまな実験アプリケーションのために世界中の研究所で広く使用されています。 実験室で一般的に使用される4種類のPCR装置は、通常のPCR、勾配PCR、in-situ PCR、および蛍光定量PCRです。 それらの違いは何ですか? 次のコンテンツはあなたが答えるのに役立ちます:

PCR:ポリメラーゼ連鎖反応。DNAを使用して95°Cでinvitroで巻き戻し(変性)します。 55°Cでは、塩基相補ペアリングの原理に従ってプライマーと一本鎖が結合(アニーリング)され、次に温度が約72°Cに調整され、DNAポリメラーゼはリン酸から 5つの炭素糖(5'-3 ')。

PCR装置は実際には温度制御装置であり、95°C、55°C、72°Cの間で温度制御をうまく行うことができます。

DNA増幅および検出標準の目的に応じて、PCR装置は、通常のPCR装置、勾配PCR装置、in-situ PCR、リアルタイム蛍光定量PCR装置などに分類できます。


①通常のPCR装置

一般に、PCR増幅のために特定のアニーリング温度しか実行できないPCRマシンは、通常のPCRマシンと呼ばれ、これも従来のPCRマシンです。 異なるアニーリング温度で使用する場合は、複数回実行する必要があります。

通常のPCR装置は、主に科学研究、教育、臨床医学、検査、検疫などで使用されます。


②グラジエントPCR装置

1回限りのPCR増幅により、勾配PCR装置と呼ばれる一連の異なるアニーリング温度条件(通常は12の温度勾配)を設定できます。 DNAフラグメントが異なれば、最適なアニーリング温度も異なります。 増幅のために一連の勾配アニーリング温度を設定することにより、1回限りのPCR増幅は、効果的な増幅のための高い発現レベルで最も適切なアニーリング温度を選別することができます。

グラジエントPCR装置は、主に未知のDNAアニーリング温度の増幅を研究するために使用され、時間とコストを節約します。 グラジエントを設定せずに通常のPCRとしても使用できます。 グラジエントPCR装置は、主に科学研究、教育機関、検査、検疫などで使用されます。


③In-situPCRマシン

PCRは、遺伝子増幅反応のために細胞または組織からDNAを抽出することですが、insitu PCRは、細胞または組織の完全性を維持し、PCR反応システムを組織および細胞に浸透させ、細胞の標的DNAの位置で遺伝子を実行することです。 。 増幅。 標的DNAを検出できるだけでなく、標的DNAが存在する細胞の種類も検出できるため、標的DNAと細胞の関係を調べるのに役立ちます。

in-situ PCR装置は、主に次の目的で使用されます。(1)外因性遺伝子断片の検出、検出率の向上、HIV、HPV、HBV、CMVなどのウイルス感染の検査に焦点を当てる。 (2)体内の病原体の分布を観察する法則(3)ヒトの単一遺伝子疾患、組換え遺伝子、転置染色体、Ig mRNAフラグメント、癌遺伝子フラグメントなどの内因性遺伝子フラグメント。(4)導入された遺伝子の検出。 (5)β-サラセミアなどの遺伝病の検出。


④リアルタイム蛍光定量PCR装置

通常のPCR装置の設計に基づいて、蛍光シグナル取得システムとコンピューター分析および処理システムを追加して、蛍光定量機能を備えたPCR装置を形成します。 PCR増幅の原理は通常のPCR増幅と同じです。 PCR増幅中に添加されたプライマーは、同位体、フルオレセインなどで標識され、プライマーと蛍光プローブは、増幅のために同時にテンプレートに特異的に結合するために使用されます。増幅された結果は、蛍光信号取得システムのリアルタイム取得信号を介してコンピュータ分析および処理システムに接続され、定量化されたリアルタイム結果出力が取得されます。

蛍光定量PCR装置は、シングルチャネル、デュアルチャネル、マルチチャネルに分けられます。標識に蛍光プローブを1つだけ使用する場合は、単一のチャネルを使用します。複数の蛍光標識がある場合は、複数のチャネルを使用してください。一度に検出できるターゲット遺伝子の増幅量は1つだけであり、異なるターゲット遺伝子フラグメントの量を検出するには複数の増幅が必要なため、単一のチャネルでマルチ蛍光マーカーとターゲット遺伝子発現産物を検出することもできます。マルチチャネルはマルチプレックスPCRに役立ち、一度に複数の標的遺伝子を検出する機能を実現します。

蛍光定量PCR装置は、主に臨床医学検査、生物医学研究開発、食品産業、科学研究機関などで使用されています。蛍光定量検出技術は、主にさまざまな病原体によって引き起こされる疾患の臨床診断に焦点を当て、臨床診断の多くの側面を持っています。肝炎疾患、性器疾患、出生前および出生後のケアに関連する疾患、結核など。


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